只有经过批准，经过专门培训的人员方可进入无菌操作区内，无论何时均需遵守这个原则。例如非无菌操作区的人员和外来参观者需进入该操作区时，必须经过有关部门批准。
进入无菌操作区的所有人员必须穿无菌服，无菌服系指防静电的长纤维制成的洁净工作服，清洗以后经过湿热灭菌处理的工作服。该无菌服多常用连体猴服，备有一头罩，上下相连，袖口和脚口可以收拢。此无菌服用防静电、不起毛的织物制成。人员每次进入无菌操作区都应更换清洁灭菌服。进入无菌操作区的人员使用的袜套和鞋面的材质要求同上。人员每次进入无菌操作区都应该更换灭菌袜套，鞋子每星期灭菌1次或用消毒剂消毒。进入无菌操作区的人员应戴上用不起毛材料做成的经过湿热灭菌的无菌口罩。口罩应罩住整个鼻部和嘴部，防止口沫和落屑。进入无菌操作区以后不能用手接触口罩，如已接触，应将手消毒。用过的口罩应丢弃在该区更衣单元内的缓冲室外侧特定的弃物桶中。
无菌操作区内人员应保持双手卫生，人员的指甲修剪整齐并保持清洁。不要使用指甲油或其它可能散落微粒子的化妆品。在下述情况下必须彻底洗手、消毒：
（1）进入无菌操作区前；
（2）开始操作前；
（3）手弄脏后。
人员在无菌操作区内应戴好已经过灭菌处理的一次性乳胶手套，操作过程中应经常用70%～75%乙醇消毒手套表面。破损的手套要及时更换，使用过的手套应弃于缓冲室外侧特定的废物桶中。
无菌操作区的操作人员按照程序更衣，再经无菌操作区人员缓冲室进入无菌操作区。人员离开无菌操作区时，脱下鞋子放在缓冲室内间专门放鞋子的地方。将口罩手套放入外间废物桶内，工作服、头套、袜套脱在缓冲室外间，放入洗衣袋中。
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